Cell stock 만들기와 풀기

오랜 기간 동안 세포실험 결과의 일관성을 가지게 하려면 cell stock 만들기와 푸는 방법에 대한 정확한 숙지가 필요합니다.

 

단순한 과정이지만 정확하게 숙지하지 못하고 실험한다면 세포실험결과 자체를 믿을 수 없게 됩니다.

 

그럼 지금부터 Cell stock 만들기와 풀기에 대해 설명드리겠습니다.

 

세포배양

 

Cell stock 만들기

 

1. 세포 다운과정까지는 계대배양과정과 같습니다.

2023.02.06 - [정보공유/연구 정보] - 계대배양 실험방법 (Subculture protocol)

계대배양 실험방법 (Subculture protocol)

 

2. 세포 다운하는 시간 동안 DMSO 50ul(5%) + serum media 950ul(95%)를 섞은 배지를 만듭니다.

 * DMSO는 동결보존제로 얼리면서 생기는 ice crystal formation으로 인한 세포의 손상을 감소시키기 위해 사용합니다.

 * 보통 25T flask의 경우 1개의 cryotube, 100pi dish의 경우 3개의 cryotube를 만드는 양이 적당하다.

 

3. DMSO와 serum media를 섞은 배지로 다운된 세포를 풀어줍니다.

 

4. Cryotube에 1ml씩 나눠 담고 라벨링 합니다.

 

5. 냉동실(-20℃)에서 하루 냉각한 후, deepfreezer(-70℃)에서 이틀 냉각한다.

 * 갑작스럽게 얼리게 되면 세포가 손상될 수 있으니 천천히 얼도록 만들어준다.

 

6. 액화질소에 보관한다.

 

7. 1주일 후에 1개의 cryotube를 풀어서 세포가 잘 자라는지 확인한다.

 * 보통 stock은 1년 단위로 풀어서 다시 stock을 만든다.

 

Cell stock 풀기

 

1. Serum media를 미리 37℃ water bath에 데워준다.

 

2. 9ml serum media를 코니칼튜브에 준비한다.

 

3. 25T flask에 4ml media를 준비한다.

 

4. Cryotube에 있는 1ml cell을 dropwise로 9ml serum media가 들어 있는 코니칼튜브에 넣고 천천히 inverting 해준다.

 

5. centrifuge(1000 RPM, 2분, 상온)로 세포를 다운시킨다.

 

6. 상층액 suction 한다.

 

7. 1ml serum media로 세포를 풀어준다.

 

8. 1ml을 전부 25T flask에 옮겨준다.

 

9. Spreading 후에 incubator에 넣어준다.

 

10. 24시간 관찰하면서 계대배양시기를 설정한다.

 

현미경 세포 사진

 

이상 cell stock 만들기와 풀기의 과정에 대해 설명드렸습니다.

 

어려운 과정이 아니니 잘 숙지하시고 실험하시기 바랍니다.

 

읽어주셔서 감사합니다.