CCK-8 Assay 와 MTT Assay 차이점?

이번에 포스팅하게 된 주제는 CCK-8 assay와 MTT assay차이점입니다.

 

두 가지 실험 모두 cell viability와 cell toxicity를 측정하는 대표적인 실험입니다.

 

실험을 하다 보면 두 가지 실험의 차이점이 무엇인지 궁금해질 때가 있습니다.

 

그래서 제가 두 실험의 차이점을 설명해 보도록 하겠습니다.

두 가지 실험 모두 cell viability와 cell toxicity를 측정하기에 매우 유용한 실험이지만 CCk-8 assay가 MTT assay보다 결과값이 더 정확하고 시험자의 손을 많이 타지 않습니다.

 

그 이유는 시험 시 파장을 측정하기 위해 생성하는  formazan의 용해도와 생성방법의 차이입니다.

 

아래의 그림으로 확인해 보겠습니다.

 

CCK-8 assay와 MTT assay의 formazan 생성 원리

 

생성되는 Formazan의 차이?

 

위의 그림은 CCK-8 assay와 MTT assay의 formazan생성 원리를 나타낸 것입니다.

 

CCK-8 assay원리는 빨간색 동그라미로 MTT assay원리는 파란색 동그라미를 보시면 됩니다.

 

CCK-8 assay의 formazan을 생성하는 물질은 WST-8으로 세포 내의 효소인 NADH, NADPH, Dehydrogenase에 의해 발색물질인 WST-8 formazan dye로 변형되는 반면, MTT assay의 formazan을 생성하는 물질인 MTT는 미토콘드라이 내 Dehydrogenase에 의해서만 발색물질인 MTT formazan dye를 생성할 수 있기 때문에 미토콘드리아의 활성에 의해 결과값이 흔들리기도 합니다.

 

또한, CCK-8 assay의 WST-8 formazan dye는 수용액상태에서 용해가 되기 때문에 미디어 suction의 과정이 없는데 MTT assay의 MTT formazna dye는 수용액상태에서 녹지 않아 미디어를 suction 하고 유기용매(DMSO)에 용해해 주는 과정이 필요합니다.

 

이때, suction 과정에서 MTT formazan dye가 미디어와 같이 suction 될 수가 있어 결과 값이 많이 흔들리기도 합니다.

 

MTT formazan dye는 수용액 상태에 녹지 않아 세포독성 또한 가지고 있습니다.

 

이러한 차이점으로 인해 CCK-8 assay가 MTT assay에 비해 정확성이 높은 실험이라고 평가를 받습니다.

 

 

여기까지 CCK-8 assay와 MTT assay의 차이점을 확인해 보았습니다.

 

이 포스팅을 읽으면 마치 MTT assay는 좋지 못한 실험이라는 생각을 하실 수도 있는데, MTT assay도 실험자가 실험 숙련도가 높은 편이라면 cell viability와 cell toxicity를 측정하기 매우 간편하고 정확한 실험입니다.

 

이상 CCK-8 assay와 MTT assay의 차이점을 알아보았습니다.

 

많은 도움이 되셨길 바랍니다.

출처: Cell Viability & Cell Toxicity - DOJINDO LABOLATORIES