Cell Seeding (Cell counting 하는 방법)

Cell 실험을 할 때 모든 군에 같은 양의 cell을 정확하게 깔아 주어야 약물효능이나 독성평가 등에서 신뢰성 높은 결과를 얻을 수 있습니다.

 

그래서 지금부터 cell seeding 하는 방법에 대해 알아보도록 하겠습니다.

 

Cell seeding 과정

 

1. 계대배양(subculture)을 끝내고 남은 cell을 가지고 seeding을 진행한다.

 

2. 남은 cell의 총볼륨을 4ml로 맞춘 후 충분히 섞어 준다.

 

3. 4ml 중 10ul를 hemocytometer에 넣고 광학현미경으로 cell을 counting 한다.

 

4. Cell counting 하는 방법

① 아래 4칸에서의 cell 개수 평균 X 10^4 X 4 => 4ml에 포함되어 있는 cell의 양

 * 10^4를 곱해주는 이유: hemocytometer 한 칸의 부피가 1mm X 1mm X 0.1mm = 0.1mm^3 = 0.1ul , 0.1ul X 10^4 = 1ml

 * 4를 곱해주는 이유: 총볼륨을 4ml로 맞춰줬기 때문에 

 

hemocytometer

 

② 필요한 cell의 양(각 well 당 cell 수 X well의 개수) ÷ 4ml에  포함되어 있는 cell의 양 X 4

 * 4를 곱해주는 이유: 4ml에서의 필요양이기 때문에

 

5. Serum media + 필요한 cell이 포함된 볼륨 = 필요한 well의 볼륨을 다 합한 볼륨

 

6. 전동파이펫을 사용하여 각각의 well에 cell을 seeding 한다.

 

7. plate에 라벨링 한다.

 * 테두리 well은 온도에 영향을 받을 수 있기 때문에 쓰지 않는 것을 추천한다.

 

여기까지 cell seeding 하는 방법에 대해 알아보았습니다.

 

cell counting 계산과정이 처음에는 익숙하지 않아 헷갈릴 수 있지만 몇 번 하다 보면 금방 익숙해지실 것입니다.

 

읽어주셔서 감사합니다.