H&E(Hematoxylin & Eosin) staining 시험법

H&E staining은 조직을 고정하여 얇게 section 한 후, hematoxylin과 eosin으로 염색하는 것을 말합니다.

 

H&E staining을 통해 조직의 상태를 확인할 수 있습니다.

 

특히, 염증반응 확인을 통해서 독성확인을 위해 주로 H&E staining을 실시합니다.

 

hematoxylin은 핵을 염색(파란색)하는 물질이고, eosin은 세포질을 염색(빨간색)하는 물질입니다.

 

그럼 시험법에 대해 알아보겠습니다.

 

H&E staining

 

H&E staining 시험법

 

[조직 자르기]

- Paraffine에 굳힌 조직을 section (약 4 um 정도) 한다.

- 에탄올이 미량 첨가된 물에 잠시 넣었다가 40℃ 물에 넣은 후 말린다.

 

[탈파라핀]

* 파라핀이 염색을 방해하기 때문에 파라핀을 제거해줘야 한다.

- 슬라이드 글라스에 말린 조직을 xylene1, 2, 3에 각 20번씩 dipping 한다.

 

[함수]

* Xylene제거와 hematoxylin과 eosin의 염색을 돕기 위해 진행한다.

- 100% EtOH에 20번 dipping 한다.

- 90% EtOH에 20번 dipping 한다.

- 80% EtOH에 20번 dipping 한다.

- D.W washing 5분간 시행한다.

 

[Hematoxylin 염색]

- Hematoxylin 7분 염색한다.

- D.W washing 5분간 시행한다.

 

[분별 및 청색화]

* 잔존하는 hematoxylin을 제거하고 eosin과의 형광 차이를 나타내기 위해 진행한다.

- Acid alcohol 30초 시행한다.

- D.W washing 30초 시행한다.

- Ammonia water 30초 시행한다.

- D.W washing 30초 시행한다.

 

[Eosin 염색]

- Eosin 3분 염색한다.

- D.W wasing 한다. (염색 정도를 보면서 판단)

 

[탈수]

* 물기 제거하기 위해 진행한다. (충분히 제거하지 않으면 뿌옇게 나옴)

- 80% EtOH 10회 dipping 한다.

- 90% EtOH 20회 dipping 한다.

- 100% EtOH 30회 dipping 한다.

 

[투명]

* EtOH를 제거하기 위해 진행한다. (앞서 사용한 xylene과는 새로운 xylene 사용)

- Xylene 1, 2, 3에 각 20번씩 dipping 한다.

- Xylene을 여과지로 제거한다.

 

[확인]

- 광학현미경으로 확인한다.

 

H&E staining은 여러 요인으로 시험방법(염색시간, 횟수 등)이 변경될 수 있습니다.

 

위에 기록된 시험방법은 참고만 하시고 하려고 하는 시험에 맞는 방법으로 진행하시기 바랍니다.

 

그러기 위해서는 여러 시행착오를 거쳐야 할 수 있습니다.

 

읽어주셔서 감사합니다!

 

이미지 출처: A novel method for tissue segmentation in high-resolution H&E-stained histopathological whole-slide images